■ 基本信息
復(fù)制子: | pUC |
原核抗性: | Amp |
真核抗性: | 熒光素酶Luc |
克隆菌株: | DH5a |
培養(yǎng)條件: | 37度 |
■ 質(zhì)粒屬性
質(zhì)粒宿主: | 哺乳細胞 |
質(zhì)粒用途: | 信號報告
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片段類型: |
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片段物種: |
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原核抗性: | Amp |
真核抗性: |
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熒光標記: | Fluc
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■ 質(zhì)粒簡介
載體pGRE-Luc可以用來檢測GRE信號通路活性。載體pGRE-Luc含有螢火蟲來源的熒光 素酶基因。這個載體也包含多拷貝的GRE結(jié)合位點序列，并且該序列和一段 TATA-類似啟動子（PTAL）融合在一起，PTAL源于單純皰疹病毒胸苷激酶（HSV-TK）啟動子。當內(nèi)源性的GRE蛋白結(jié)合到GRE增強元件時，轉(zhuǎn)錄起始，報告基因開始表達。 熒光素酶編碼序列后有一段 SV40 多聚腺苷酸信號以確保在真核細胞中能正確有效的轉(zhuǎn)錄。 在 GRE 結(jié)合位點的上游有一段合成的轉(zhuǎn)錄抑制區(qū)（TB），該區(qū)域由多聚腺苷酸信號與轉(zhuǎn)錄 終止位點組成，以減少轉(zhuǎn)錄背景。該載體骨架也包含了一個f1復(fù)制起始區(qū)域以便進行單鏈 DNA 的復(fù)制，一個pUC復(fù)制起始位點以及一個氨芐抗性基因，便于進行培養(yǎng)篩選。
載體pGRE-Luc用來檢測轉(zhuǎn)錄因子GRE與GRE增強子的作用，提供了直接檢測這條通路活性的途徑。該載體可以和一個目的基因的表達載體共轉(zhuǎn)來觀察，其是否影響這條通路的活性。 熒光素酶是一種高敏感性的酶原性報告蛋白，適用于任何一種標準的熒光素酶檢測法，可以用來定量表達水平。pGRE-Luc載體可以用任何一種標準的方法轉(zhuǎn)染至哺乳動物細胞。為了篩選穩(wěn)定克隆，轉(zhuǎn)染的載體通常含有抗性篩選基因如：neomycin，hygromycin或者puromycin。
合適的宿主系：DH5α 以及一些其他通用系。進行單鏈DNA的合成宿主菌需要包含一個 F’ episome，比如 JM109。 篩選標記：質(zhì)粒為宿主E.coli提供了氨芐抗性（100ug/ml）E.coli 復(fù)制起始位點：pUC 拷貝數(shù)：~500不相容質(zhì)粒:pMB1/ColE1。
■ 質(zhì)粒圖譜
■ 質(zhì)粒序列
質(zhì)粒序列請下載：
測序所得的部分序列
1 gaattgttca ggaccagggc gtatctcttc atagccttat gcagttgctc tccagcggtt
61 ccatcttcca gcggatagaa tggcgccggg cctttcttta tgtttttggc gtcttccatg
121 gtggctttac caacagtacc ggaatgccaa gcttctgctt catccccgtg gcccgttgct
181 cgcgtttgct ggcggtgtcc ccggaagaaa tatatttgca tgtctttagt tctatgatga
241 cacaaacccc gcccagcgtc ttgtcattgg cgaattcgaa cacgcagatg cagtcggggc
301 ggcagatcta gaacaaaatg taccggtaca ttttgttcta gaacaaaatg taccgctagc
361 acgcgtaaga gctcggtacc tatcgataga gaaatgttct ggcacctgca cttgcactgg
421 ggacagccta ttttgctagt ttgttttgtt tcgttttgtt ttgatggaga gcgtatgtta
481 gtactatcga ttcacacaaa aaaccaacac acagatgtaa tgaaaataaa gatattttat
541 tgcggccgct ccaagtacct cccgtacctt aatattactt acttatcatg gtagcttggg
601 ctggcgtaat agcgaagagg cccgcaccga tcgcccttcc caacagttgc gcagcctgaa
661 tggcgaatgg caaattgtaa gcgttaatat tttgttaaaa ttcgcgttaa atttttgtta
721 aatcagctca ttttttaacc aataggccga aatcggcaaa atcccttata aatcaaaaga
781 atagaccgag atagggttga gtgttgttcc agtttggaac aagagtccac tattaaagaa
841 cgtggactcc aacgtcaaag ggcgaaaaac cgtctatcag ggcgatggcc cactacgtga
901 accatcaccc taatcaagtt ttttggggtc gaggtgccgt aaagcactaa atc
