■ 基本信息
別名: | pColdProS2 |
啟動(dòng)子: | CSPA |
復(fù)制子: | pBR322 |
質(zhì)粒分類(lèi): | 大腸桿菌載體；pCold系列表達(dá)質(zhì)粒 |
質(zhì)粒大小: | 5025bp |
質(zhì)粒標(biāo)簽: | ProS2 |
原核抗性: | Amp |
克隆菌株: | DH5a |
培養(yǎng)條件: | 37度 |
表達(dá)宿主: | 大腸桿菌 |
培養(yǎng)條件: | 37℃，有氧，LB |
5'測(cè)序引物:
| pCold-F：5-ACGCCATATCGCCGAAAGG-3 |
3'測(cè)序引物: | pCold-R：5-GGCAGGGATCTTAGATTCTG-3 |
■ 質(zhì)粒屬性
質(zhì)粒宿主: | 大腸桿菌 |
質(zhì)粒用途: | 蛋白表達(dá) |
片段類(lèi)型: | ORF
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片段物種: | 空載體
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原核抗性: | Amp |
真核抗性: |
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熒光標(biāo)記: |
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■ 質(zhì)粒簡(jiǎn)介
pCold ProS2 DNA 是一種融合的冷休克表達(dá)載體，使用來(lái)源于革蘭氏陰性菌Myxococcus xanthus中的Protein S作為可溶性標(biāo)簽。這種Protein S存在于粘細(xì)菌的孢子衣中，由173個(gè)氨基酸殘基組成，是一種非常穩(wěn)定的可溶性蛋白質(zhì)。將兩個(gè)Protein S的N-末端結(jié)構(gòu)域串聯(lián)，再結(jié)合ProS2 Tag的作用，就能使融合目的蛋白的穩(wěn)定性和可溶性得到提高。此外，由于目的蛋白和ProS2-Tag的相互作用性很低，因此可以將二者有效分離。pCold ProS2 DNA Vector在cspA啟動(dòng)子的下游插入了5’非編碼區(qū)(5’-UTR)、翻譯增強(qiáng)元件(TEE)、His-Tag序列、ProS2-Tag和多克隆位點(diǎn)(MCS)。在ProS2-Tag和多克隆位點(diǎn)(MCS)之間主要是HRV3C Protease、Thrombin和Factor Xa的切斷位點(diǎn)，用來(lái)消除融合蛋白質(zhì)的標(biāo)簽。此外，在cspA啟動(dòng)子下游還插入了lac operator，可以嚴(yán)格調(diào)控目的基因的表達(dá)。由于本制品的啟動(dòng)子是大腸桿菌來(lái)源的，所以大部分大腸桿菌都可以作為表達(dá)宿主使用?？傊?，pCold ProS2 DNAVector提供的冷休克技術(shù)，能夠促進(jìn)蛋白質(zhì)的正確折疊，增加目的蛋白質(zhì)的可溶性，對(duì)于一些棘手的目的蛋白質(zhì)的表達(dá)是一個(gè)很好的選擇。
■ 質(zhì)粒圖譜
■ 質(zhì)粒序列
質(zhì)粒序列請(qǐng)下載：
ZK1595 pCold-ProS2大腸表達(dá)質(zhì)粒.txt
