產(chǎn)品介紹:

KM71H是畢赤酵母菌株，屬于真核細(xì)胞。一般的針對原核生物的抗生素例如卡那和氨芐對酵母是無效的，因此為了防止大腸桿菌等原核生物對酵母培養(yǎng)菌株污染，往往會在培養(yǎng)基中加入一些氨芐和卡那霉素的抗生素，來抑制細(xì)菌菌的污染和生長。畢赤酵母適宜的生長溫度是28至30℃，溫度超過32℃對蛋白的表達(dá)是有害的，并可能導(dǎo)致細(xì)胞的死亡。KM71H畢赤酵母被推薦用來表達(dá)含有Zeocin抗性的載體載體重組質(zhì)粒，例如pPICZ A,B,C系列的載體。在篩選KM71H重組轉(zhuǎn)化菌株時，Zeocin抗生素的工作濃度是100μg/ml。

KM71H宿主菌中的AOX1基因含有一個片段缺失，當(dāng)pPICZ A,B,C或者pPICZα A,B,C轉(zhuǎn)化到KM71H中時只能產(chǎn)生出MutS轉(zhuǎn)化株，不必在進(jìn)行Mut基因型的篩選了。KM71H的來源母細(xì)胞在精氨琥珀酸裂解酶基因(arg4)含有一個突變，這使得菌株無法在不含有精氨酸的培養(yǎng)基中生長。而KM71H酵母細(xì)胞中在AOX1基因處插入了一個正常的arg4基因，從而形成了KM71H的MutS, Arg+表型。將約2kb的Arg4基因克隆出來后插入到KM71H來源菌株內(nèi)的野生型的AOX1基因的BamH I（16 bp）和Sal I（227 bp）中間，從而構(gòu)建成功KM71H。ARG4基因直接替換了AOX1基因的16-227片段序列。KM71H畢赤酵母細(xì)胞的優(yōu)點(diǎn)是不需要利用甲醇minimal media篩選菌株的Mut基因型，因?yàn)樗械霓D(zhuǎn)化株都是MutS菌株。另外，AOX1基因并沒有被完全刪除，理論上你可以用自己的基因替換其中的Arg4基因，從而生成MutS, Arg-的轉(zhuǎn)化株，但是由于實(shí)驗(yàn)表明該基因型酵母菌株在含有精氨酸的minimal media上并不能很好的生長，所以并不鼓勵大家進(jìn)行這種基因替換嘗試。

基因型：aox1::ARG4, arg4，表型：MutS, Arg+。