產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
Y187 菌株是 GAL4 系統(tǒng)酵母單雙雜實(shí)驗(yàn)常用菌株，MATa 型，可直接轉(zhuǎn)化質(zhì)?；蚺cMATa 型酵母菌株(Y2HGold，AH109 等)通過(guò) mating 操作進(jìn)行篩庫(kù)實(shí)驗(yàn)。篩選標(biāo)志為:trpl，leu2 ，報(bào)告基因?yàn)?lacZ，MEL1。Y187-pHis2 系統(tǒng)酵母單雜需要pHis2 和 pGADT7-Rec2 兩種質(zhì)粒配套使用。質(zhì)粒 pHis2 的篩選標(biāo)志為 TRP，用于表達(dá) pBait-His2 construct(1~3 個(gè) bait DNA 序列重復(fù)串聯(lián)后克隆到 pHis2 中);質(zhì)粒pGADT7-Rec2 的篩選標(biāo)志為 LEU，用于表達(dá) AD(GAL4 C端 768~881 位氨基酸)與目標(biāo)蛋白(Prey)的融合蛋白。Y187-pHis2 系統(tǒng)酵母單雜原理:當(dāng)獵物蛋白(Prey)結(jié)合到誘餌序列(Bait DNA)上，GAL4 AD 就會(huì)激活下游報(bào)告基因 HIS3 的表達(dá)，能夠在含有 3-AT 的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，從而確定 DNA 和蛋白有相互作用。
本方案中檢測(cè)誘餌酵母菌株的 3-AT 最佳使用濃度和互作驗(yàn)證都采用了稀釋點(diǎn)板的方法，與涂板的方法相比，點(diǎn)板法能更直觀的體現(xiàn)出 DNA 和蛋白的互作，還能減少培養(yǎng)基和 3-AT的使用量。本方案還對(duì)常見(jiàn)的酵母單雜結(jié)果進(jìn)行了分析。
